Crioconservación de genotipos adultos de castaño y alcornoque seleccionados en campo - VIDAL, N; BALLESTER, A; FERNÁNDEZ, M R; CUENCA, B; OCAÑA, L (V Congreso Forestal Español, 2009)
La entrada en vigor del Real Decreto 289/2003 sobre Comercialización de materiales Forestales de reproducción puso de manifiesto la carencia de materiales genéticos de calidad de muchas especies de frondosas forestales de alto valor económico, como el castaño y el alcornoque. Desde el año 2000, la empresa pública TRAGSA trabaja en la selección y desarrollo de materiales cualificados de ambas especies para su propuesta al Catálogo Nacional de Materiales de Base. En la actualidad, en los laboratorios de la empresa se micropropagan 129 genotipos adultos de castaños y 29 de alcornoque, todos ellos seleccionados como árboles plus, así como varios cientos de progenies de esta última especie. Las vitroplantas aclimatadas se emplean en la realización de los ensayos necesarios para la propuesta de estos materiales al CNMB pero al mismo tiempo, es necesario conservar los cultivos de yemas axilares en el caso del castaño, y las líneas embriogénicas, en el caso del alcornoque en las mejores condiciones, que aseguren el mantenimiento de su tasa de multiplicación y de su identidad clonal durante todo el tiempo que se prolonguen los ensayos. Por este motivo, para ambas especies se han adaptado protocolos de crioconservación desarrollados en el IIAG-CSIC que están permitiendo el desarrollo de bancos de germoplasma estables para el mantenimiento a largo plazo de ambas especies. Hasta el momento se han crioconservado 22 genotipos de alcornoque y 39 de castaño. En alcornoque el porcentaje de explantos reactivos tras la crioconservación es siempre superior al 65% asegurando la adecuada recuperación de la línea embriogénica. En castaño, algunos genotipos presentan recuperaciones muy bajas, por lo que en la actualidad se ensayan diferentes sistemas que mejoren la viabilidad de los ápices tras la descongelación. Palabras
Keywords: Alcornoque; bancos de germoplasma; Castaño; CNMB; cultivo in vitro; nitrógeno líquido

Efecto de las características del biorreactor y de su manejo sobre el desarrollo de cultivos embriogénicos de alcornoque - JIMENEZ, J; ALONSO BLÁZQUEZ, N; HERNÁNDEZ, I; CARNEROS, E; CUENCA, B; OCAÑA, L; RUIZ, M; CELESTINO, C; TORIBIO, M; J., ALEGRE (V Congreso Forestal Español, 2009)
En el marco del proyecto SEFEAL-2, liderado por TRAGSA, se aplican protocolos de embriogénesis somática (ES) para desarrollar variedades de alcornoque de alta calidad y productividad. Al mismo tiempo se mejora la técnica de ES para abaratar los costes y permitir su aplicación a escala comercial. En el alcornoque, como en otras especies, el desarrollo comercial de la embriogénesis como técnica de multiplicación masiva se basa en el uso de biorreactores y medios líquidos agitados. El diseño del biorreactor, su sistema de cierre y el nivel de agitación determinan el grado de mezclado, el estrés hidrodinámico y el intercambio gaseoso, y por ello afectan tanto al crecimiento como al desarrollo de los cultivos embriogénicos. Mediante un ensayo factorial se testaron 3 tipos de envase y tres niveles de agitación. Los efectos sobre el intercambio gaseoso se estimaron a través de la tasa de transferencia de O2 (OTR) y su coeficiente volumétrico de transferencia de masa (KLa), y los efectos sobre el nivel de mezclado mediante el “shear force index” (SFI), un indicador de estrés hidrodinámico. El tipo de envase afectó básicamente al número total de agregados embriogénicos y a la frecuencia de formación de los agregados de mayor tamaño. El nivel de agitación tuvo mayores efectos que el tipo de envase tanto sobre el número como sobre el tamaño de los agregados. Para las condiciones ensayadas, que dieron lugar a valores de KLa comprendidos entre 0,11 h-1 y 1,47 h-1, la disponibilidad de oxígeno no pareció limitante. En cualquier caso, los efectos del tipo de envase y del nivel de agitación sobre los procesos de crecimiento y desarrollo de los materiales embriogénicos de alcornoque fueron complejos resultando muy significativa la interacción tipo de envase por nivel de agitación
Keywords: Biotecnología forestal; embriogénesis somática; medio líquido; Quercus suber L.

Regeneración clonal de alcornoques selectos mediante embriogénesis somática - HERNÁNDEZ, I; CUENCA, B; CARNEROS, E; ALONSO BLÁZQUEZ, N; RUIZ, M; CELESTINO, C; OCAÑA, L; ALEGRE, J; TORIBIO, M (V Congreso Forestal Español, 2009)
Para implementar la silvicultura multivarietal se precisa disponer de una metodología de propagación vegetativa eficiente y económicamente viable. La embriogénesis somática se está asentando como la vía de clonación más adecuada para las especies forestales consideradas recalcitrantes. En el IMIDRA hemos logrado poner a punto un protocolo de inducción de embriogénesis somática en hojas de alcornoques adultos, aplicable a cualquier genotipo, que permite clonar árboles selectos. En el marco del proyecto SEFEAL-2, liderado por TRAGSA, se está aplicando este protocolo con el objetivo de clonar 70 árboles seleccionados por su calidad y productividad en procedencias extremeñas, a fin de establecer los oportunos ensayos clonales que permitan evaluar dicho material para su inclusión en el Catálogo Nacional de Materiales de Base, en la categoría controlado. Hasta el momento se ha trabajado con 59 genotipos, en 51 de ellos se han obtenido brotes epicórmicos y por tanto hojas para inducir embriogénesis, lográndose líneas embriogénicas en 44 de estos últimos. Por tanto, al primer intento se ha logrado la inducción en un 86% de los genotipos ensayados. Se indujo embriogénesis en un 17 % de las hojas introducidas en cultivo, variando la frecuencia con el genotipo entre 0 y 56%. Las líneas se amplificaron por embriogénesis recurrente y los embriones, tanto madurados espontáneamente como sometidos a un tratamiento de maduración, fueron estratificados y dispuestos a germinar. Los porcentajes de conversión a plántula oscilaron en función del genotipo entre el 37 y el 75% para los embriones sometidos a un tratamiento de maduración, y entre el 9 y el 87% para los madurados espontáneamente. La supervivencia media de las vitroplantas regeneradas de embriones que maduraron espontáneamente fue del 17%, variando en función del genotipo entre 0 y 33%, mientras que las que procedieron de embriones somáticos sometidos a tratamiento de maduración fue del 26%, oscilando entre el 12 y el 52% según genotipos. Palabras
Keywords: Biotecnología forestal; clonación; cultivo in vitro; Quercus suber L.; silvicultura multivarietal

CLONACIÓN DE PROGENIES DE ALCORNOQUES PLUS DE CUATRO REGIONES DE PROCEDENCIA MEDIANTE EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA PARA LA OBTENCIÓN DE MATERIALES FORESTALES DE REPRODUCCIÓN - CUENCA, B; López, C; Pato, B; OCAÑA, L; Santos, M I; Manzanera, J A; Pintos, B; Bueno, M A (IV Congreso Forestal Español, 2005)
Se ha realizado una selección fenotípica individual de árboles plus de alcornoque en los rodales selectos establecidos por el Instituto del Corcho, la Madera y el Carbón Vegetal (ICMC, Junta de Extremadura) en cuatro regiones de procedencia: Montes de Toledo-Villuercas, Sierra Morena Occidental, Sierra de San Pedro, y Norte de Cáceres-Salamanca. De los árboles seleccionados se han recogieron estaquillas en primavera de 2002 y 2003, y bellotas inmaduras durante el verano de 2002, 2003 y 2004. De las estaquillas se establecieron inicialmente 48 clones mediante cultivo de yemas axilares (MANZANERA y PARDOS, 1990). La elevada edad de los árboles hizo imposible la estabilización y mantenimiento de los cultivos y actualmente sólo sobrevive 1 de los clones. De los embriones cigóticos inmaduros, según protocolo de BUENO et al. (1992), se consiguió inducir embriogénesis somática en los 55 árboles muestreados de los 61 seleccionados. Estas líneas son regularmente subcultivadas, y los embriones obtenidos madurados, germinados y aclimatados para el establecimiento de ensayos de progenie con propósito de disponer de materiales de mejora. En enero de 2005 se estableció la primera finca de ensayo y actualmente se dispone de 1400 vitroplantas más para el establecimiento de nuevas parcelas. Palabras
Keywords: Corcho; cultivo in vitro; embriones; Quercus suber; selección